技术成果｜猪肺炎支原体黏膜sIgA抗体检测试剂盒及其应用

【前言】

猪肺炎支原体感染导致猪支原体肺炎，是世界范围内重要的猪传染病，感染率高达70%~90%，发病率在40%以上。对于该病的诊断与防控有两大技术障碍：

1．猪肺炎支原体免疫原性较弱，感染进程慢且以隐性感染为主，现有的检测技术无法在感染第一时间作出快速准确的诊断。

2．猪肺炎支原体特异性的血清抗体滴度与免疫保护无关，且常规的血清抗体检测试剂盒无法区分疫苗抗体、感染抗体和母源抗体，临床缺乏对疫苗产品免疫效果的快速评价方法。

【成果背景】

黏膜sIgA抗体是病原感染后宿主最早分泌的局部抗体，也是代表黏膜免疫免疫水平的关键指标。团队历经八年研究，以针对猪肺炎支原体特异性早期蛋白的黏膜sIgA抗体为检测靶标，以无针化采集的猪鼻拭子为检测样本，研发完成猪肺炎支原体ELISA抗体（sIgA）检测试剂盒，于2018年获国家新兽药注册证书[(2018)新兽药证字4号]。

该试剂盒是国际上首个以呼吸道特异性sIgA抗体为检测对象的猪肺炎支原体ELISA检测试剂盒，一方面实现了猪肺炎支原体强毒感染后4天检测，解决了现有血清抗体检测试剂盒无法实现早期诊断以及感染与免疫区别诊断的短板；更重要的是为猪肺炎支原体疫苗的免疫效果评价建立了准确、快速的临床评价方法，突破了猪支原体肺炎疫苗免疫评价一直依赖本动物的技术难关。

【成果应用】

1. 净化场的感染监测与早期诊断

成果优势：本成果技术在猪肺炎支原体人工感染后，最早4天即可检测到sIgA抗体转阳，比常规血清IgG抗体ELISA产品提前2周以上。——冯志新等. Vet. J.2014

图1.感染MHP后不同时间黏膜IgA抗体和血清IgG抗体检出率

应用场景：流行病学的监测

2. 疫苗与药物使用效果的评估

成果优势：本成果技术可有效区分感染抗体、疫苗抗体和母源抗体，突破常规血清IgG抗体ELISA产品的技术瓶颈。通过比较疫苗与药物使用前后sIgA抗体阳性率与滴度的差异，可对疫苗与药物临床应用效果作出评价。

图3.感染野毒或免疫MHP灭活苗后黏膜IgA抗体检测结果

应用场景：灭活疫苗免疫效果的评估

提示：对于灭活疫苗免疫场，

整体sIgA抗体阳性率的降低，说明良好的免疫效果

接种猪肺炎支原体灭活疫苗后，育肥猪群（图4C）相对于未接种猪肺炎支原体灭活疫苗的猪群（图4B）sIgA抗体阳性率与咳嗽率均显著下降。而血清IgG抗体阳性率均在50%左右，差异不明显，与咳嗽率相关性不强。 

图4. (B)灭活疫苗免疫前不同年龄段猪群的抗体阳性率；(C) 灭活疫苗免疫前不同年龄段猪群的抗体阳性率。（绿色：sIgA; 黑色：IgG；红色：咳嗽率）

应用场景：活疫苗免疫效果的评估

提示：对于活疫苗免疫场，

整体sIgA抗体阳性率降低，离散度减小，说明良好的免疫效果

接种猪肺炎支原体活疫苗后，保育育肥猪群相对于未接种疫苗的猪群sIgA抗体阳性率更低、离散度更小。

供稿：白昀

审核：冯志新